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健全性（ＷＨＯＬＥＳＯＭＥＮＥＳＳ）：毒性・微生物学的安全性、栄養学的適格性を総合した考え方

毒性に関する研究（変異原性を含む）

発表場所 : 食品照射研究運営会議
著者所属機関名 : 厚生省国立衛生試験所、（財）食品薬品安全センター
発行年月日 : 昭和６３年　３月

放射線照射によるみかんの表面殺菌に関する研究成果報告書［資料編］−２．安全性に関する研究

２． 電子線照射みかんの安全性に関する研究

１． 慢性毒性試験

（１） マウスを用いた慢性毒性試験

１ 緒言

　電子線照射みかんの安全性を調べる目的でマウスによる２４ヶ月間の慢性毒性試験を行った。

２ 試験方法

（１） 検体および投与方法

　科学技術庁食品照射研究運営会議指定の和歌山県産Ｌ級温州みかんを２分して、一方を非照射みかんとし、他方は日本原子力研究所大阪研究所において１５０ｋｒａｄの電子線照射を行い照射みかんとして、各々ジュース加工々場において、殺菌処理を除く通常の方法で、濃縮ジュース（濃縮率１／５、水分含量約５０％）を作製した。

　これらをマウス飼育用粉末飼料（オリエンタル酵母製ＭＦ）に非照射および照射みかんともに６Ｗ／Ｗ％の割合で混合し、円柱型ペレットに成型して検体飼料とした。これらの飼料を２４ヶ月間に亘り自由に動物に与えた。

（２） 供試動物および飼育条件

　静岡県実験動物農業協同組合産の生後４週齢の雄雌のＳｌｃ：ｄｄＹマウス（ＳＰＦ）を購入後１週間馴化飼育し、５週齢時に健康と思われるマウスを雄雌各々５０匹からなる２群に分け、各々非照射群（Ｎ群）および照射群（Ｒ群）とした。

　動物は、当所マウス飼育室（温度：２３±１℃、湿度：５５±５％、照明：１２時間明・１２時間暗、バリアーシステム）にて飼育し、プラスチック製マウス用ケージ（寸法Ｗ２１６×Ｌ３１６×Ｈ１３０ｍｍ）１個につき、雄は２匹、雌は３匹を収容した。飲水はタンク式自動給水装置による水道水を自由に摂取させた。

（３） 観察

　一般状態および死亡の有無は毎日観察し、体重および摂飼量は、実験開始後６ヶ月目までは週１回、１２ヶ月目までは隔週、それ以降２４ヶ月目まで４週に１回の割合で測定した。

　実験開始後２４ヶ月目に生存する全動物を屠殺し、外表および諸臓器の肉眼的検査を行った後、脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、精巣（卵巣）、脳下垂体、甲状腺、副腎、胸腺、顎下腺、スイ臓、消化管、腸間膜リンパ節、精嚢、精巣上体、子宮、膀胱、座骨神経、筋肉（骨格筋）、大腿骨および脊髄を摘出し、１０％等張中性ホルマリン溶液にて固定し、常法に従ってヘマトキシリン−エオジン染色標本を作製し、組織学的検査に供した。

　途中死亡動物についても、発見後可及的速やかに解剖を行い、臓器の肉眼的および組織学的検査を行った。

　なお、死亡率の計算は、ｌｉｆｔ−ｔａｂｌｅ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌを用いて行い、実験結果の統計的有意性は、χ・Ｅ（２）テストにより検討した。

３ 結果

（１） 一般状態

　２４ヶ月間の飼育期間を通じて、雄雌ともに特記すべき徴候の発現は認められない。

（２） 体重および摂飼量（図１、２）

　雄では、Ｒ群がＮ群に比べ終始軽度の体重増加の抑制が見られるが、雌ではＲ群が逆に１０ヶ月頃より増加の傾向を示す。

　摂餌量には雄雌ともに両群間にほとんど差は見られない。

（３） 死亡率（表１）

　２４ヶ月目までの途中死亡動物の月別例数および死亡率は、雄雌ともに群間にほとんど差をみないが、全体的に雌がやや高い傾向を示す。

（４） 病理組織学的検査

　実験期間中に死亡した動物および２４ヶ月後に屠殺した動物のうち検査が可能であった動物の数は、雄ではＮ群で４８例とＲ群で４９例であり、雌ではＮ群で５０例とＲ群で４９例である。

　なお、雄のＮ群の２例とＲ群の１例および雌のＲ群の１例は、自己融解が著明なために所見が取れなかったので検査の対象から除外した。

　肉眼的検査（表２）

　主な変化は、雄雌各群ともに肺の腫瘤が多く見られることであった。その他、雄では脾臓および腸間膜リンパ節の肥大がＮ群に多く認められる。雌でも脾臓および腸間膜リンパ節の肥大が認められるが、Ｎ群とＲ群の間に差を見ない。また乳腺の腫瘤がＲ群でわずかに多く認められるが有意差は認められない。

　組織学的検査（表３、４）

　雄雌ともに肺の腺腫が多く認められるが、雄雌ともＮ群とＲ群の間に差を見ない。乳腺の腺腫は、雌のＲ群でＮ群より高い傾向を示す。一方、リンパ性白血病は雄雌ともにＮ群で多く認められるが、有意の差は認められない。また、その他の臓器にも１〜３例の腫瘍を認めるが、雄雌とも群間に一定の傾向は認められない。なお、雌のＲ群で１例、腹腔内に組織球腫を認めるが、その原発臓器は不明である。

　腫瘍発現状況および例数（図３、４）

　雄ではＮ群で９ヶ月目より、Ｒ群で１６ヶ月目、また、雌ではＮ群で５ヶ月目より、Ｒ群で７ヶ月目より、腫瘍の発現を認める。

　腫瘍発現例数（表３、４）は、雄ではＮ群で実験期間中に死亡した３８例中３１例および屠殺した１０例中７例の計３８例（７９．２％）に、Ｒ群で実験期間中死亡した４０例中２７例および屠殺した９例中６例の計３３例（６７．３％）である。雌ではＮ群で実験期間中死亡した４７例中２９例および屠殺した３例中全ての計３２例（６４．０％）に、Ｒ群で実験期間中死亡した４６例中３１例および屠殺した３例中１例の計３２例（６５．３％）である。

４ 小括

　電子線照射みかんの安全性を調べる目的でマウスによる２４ヶ月間の慢性毒性試験を行った。

　一般状態、体重、摂餌量および死亡率においては、雄雌ともに群間に著しい差はなく、病理組織学的検査では、肉眼的検査で雄雌各群ともに肺の腫瘤が最も多く見られたが、顕微鏡的検査では、これらの多くは腺腫であった。その他の臓器にも腫瘍の発現を見るが、散発的であり、肺の腺腫と同様に雄雌とも群間に一定の傾向を認めない。また、腫瘍発現状況および例数とも群間に明らかな差は認められない。

　以上の結果、本試験では、電子線照射みかんによると見なされる影響はないものと判断される。

（２） ラットを用いた慢性毒性試験

１ 緒言

　電子線照射みかんの安全性を調べる目的で、ラットによる２４ヶ月間の慢性毒性試験を行った。

２ 試験方法

（１） 検体および投与方法

　科学技術庁食品照射研究運営会議指定の和歌山県産Ｌ級温州みかんを２分して、一方を非照射みかんとし、他方は日本原子力研究所大阪研究所において１５０ｋｒａｄの電子線照射を行い照射みかんとし、各々ジュース加工々場において、殺菌処理を除く通常の方法で、濃縮ジュース（濃縮率１／５、水分含量約５０％）を作製した。これらをラット飼育用粉末飼料（オリエンタル酵母製ＭＦ）に非照射および照射みかん共に２および６Ｗ／Ｗ％の割合で混合し、円柱型ペレットに成型して検体飼料とした。これらの飼料を２４ヶ月に亘り自由に動物に与えた。

（２） 供試動物および飼育条件

　静岡県実験動物農業協同組合産の生後４週齢のＳｌｃ：ｗｉｓｔａｒラット（ＳＰＦ）を購入後１週間馴化飼育し、５週齢時に健康と思われるラットを、雄雌各々１群５０匹からなる４群に分け、非照射群（２％：Ｎ−２、６％：Ｎ−６）および照射群（２％：Ｒ−２、６％：Ｒ−６）とした。

　動物は、当所ラット飼育室（温度：２３±１℃、湿度：５５±５％、照明：１２時間明・１２時間暗、バリアーシステム）にて、各々個別ケージ（寸法Ｗ２２０×Ｌ２２０×Ｈ１７０ｍｍ）に入れ、飲水は自動給水装置による水道水を自由に摂取させるベルト式自動飼育機で飼育した。

（３） 観察および測定項目

　一般状態および死亡の有無は毎日観察し、体重および摂飼量は、実験開始後６ヶ月目までは週１回、１８ヶ月目までは隔週、それ以降２４ヶ月目まで４週に１回の割合で測定した。

　実験開始後６、１２および１８ヶ月目に、各群雄雌８匹ずつを任意に選び、２４ヶ月目に生存する全ての動物について次の諸検査を行った。

　血液形態学的検査

　６、１２、１８および２４ヶ月目の剖検日の１週間前に眼窩静脈叢から採血し、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン量（Ｈｂ）、ヘマトクリット値（Ｈｔ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、血小板数（ＰＬＴ）および白血球数（ＷＢＣ）をコールターカウンターＳＰ型（コールターエレクトロニクス社製）を用いて測定し、さらに塗沫標本（ギムザ染色）を作り、白血球百分比を算出した。

　血液生化学的検査

　血液形態学的検査実施１週間後に、同じ動物を用い、エーテル麻酔下で眼窩静脈叢より採血し、分離した血清を用いて表１に示す項目について、ジェムサック４型自動分析機（Ｅｌｅｃｔｒｏ　Ｎａｃｌｅｏｎｉｃｓ社製）を用いて測定した。

　なお、Ｎａ、ＫおよびＣｌは日立７０２型電解質自動分析機（日立製作所製）で測定した。

　病理組織学的検査

　頸動脈より放血致死させた後解剖し、外表および諸臓器の肉眼的検査を行い、脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、精巣（卵巣）、脳下垂体、甲状腺および副腎を取出して重量を測定した。また、これらの諸臓器の他に顎下腺、胸腺、脊髄、消化管、すい臓、腸間膜リンパ節、精嚢、精巣上体、子宮、膀胱、座骨神経、筋肉（骨格筋）および大腿骨を摘出し、１０％等張中性ホルマリン溶液にて固定し、組織学的検査に供した。

　なお、死亡率の計算はｌｉｆｅ−ｔａｂｌｅ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌを用いて行い、実験結果の統計的有意性は、Ｓｔｕｄｅｎｔｓ　ｔ−ｔｅｓｔにより、同一添加量の非照射群と照射群の間で検討した。

３ 結果

（１） 一般状態

　飼育期間の２４ヶ月間に、各群の雄雌とも、特記すべき徴候の発現は認められない。

（２） 体重および摂餌量（図１、２）

　体重：雄では、Ｒ−２群でＮ−２群に比べ終始軽度の成長抑制が見られる。Ｎ−６群とＲ−６群との間には、ほとんど差がない。雌では、各群間にほとんど差は見られない。

　摂餌量：雄雌とも各群間にほとんど差は見られない。

（３） 死亡率（表２）

　雄では、Ｒ−２群がＮ−２群に比べ低い死亡率を示す外は、Ｎ−６群とＲ−６群の間にも、また雌の各群間においても、差は認められない。

（４） 血液形態学的検査

　６ヶ月目（表３、４）

　雄では、Ｒ−６群でＭＣＶがＮ−６群に比べ有意の増加を、雌ではＲ−２群でＲＢＣがＮ−２群に比べ有意の減少を示す。

　１２ヶ月目（表５、６）

　雄では、Ｒ−６群でＰＬＴがＮ−６群に比べ有意の増加を示す。雌では群間に差を見ない。

　１８ヶ月目（表７、８）

　雄では、Ｒ−２群でＷＢＣがＮ−２群に比べ有意の減少を示す。雌では、Ｒ−２群でＭＣＶおよびＭＣＨがＮ−２群に比べ有意の増加を示す。

　２４ヶ月目（表９、１０）

　雄では、Ｎ−２群でＨｂおよびＭＣＨがＮ−２群に比べ有意の増加を示し、Ｒ−６群でＭＣＶがＮ−６群に比べ有意の減少を示す。雌では、Ｒ−２群でＭＣＶがＮ−２群に比べ有意の増加を、ＭＣＨＣが逆に有意の減少を示し、Ｒ−６群でＭＣＶおよびＭＣＨがＮ−６群に比べ有意の増加を、ＰＬＴおよびＷＢＣが有意の減少を示す。

　上述のように６、１２、１８および２４ヶ月目の各時期において、白血球百分比も含め同一添加量の非照射群および照射群の間に一定傾向の差を見ない。

（５） 血液生化学的検査

　６ヶ月目（表１１、１２）

　雄では、Ｒ−２群でＰＬおよびＴ−ＣＨＯがＮ−２群に比べ有意の増加を、Ｋが有意の減少を示す。また、Ｒ−６群でＬＡＰがＮ−６群に比べ有意の増加を示す。雌では、Ｒ−２群でＡＬＢがＮ−２群に比べ有意の増加を、Ｐｉが有意の減少を示し、Ｒ−６群でＧＰＴがＮ−６群に比べ有意の減少を示す。

　１２ヶ月目（表１３、１４）

　雄では、Ｒ−２群でＣＲＮがＮ−２群に比べ有意の増加を、Ｒ−６群でＣＨＥがＮ−６群に比べ有意の増加を示す。雌では、Ｒ−２群でＣＲＮ、ＣｌおよびＭｇがＮ−２群に比べいずれも有意の上昇を、Ｃａが有意の低下を示し、Ｒ−６群でＵＡおよびＫがＮ−６群に比べいずれも有意の低下を示す。

　１８ヶ月目（表１５、１６）

　雄では、Ｒ−２群でＧＬＵおよびＰｉがＮ−２群に比べいずれも有意の減少を示す。また、Ｒ−６群でＧＬＵがＮ−６群に比べ減少傾向を示す。雌では、Ｒ−２群でＴ−ＰＲＯ、ＢＵＮ、ＣＲＮ、ＬＤＨ−Ｐ、Ｎａ、ＣｌおよびＭｇがＮ−２群に比べいずれも有意の増加を、ＮＥＦＡが有意の減少を示す。また、Ｒ−６群でＧＬＵがＮ−６群に比べ有意の減少を示す。

　２４ヶ月目（表１７、１８）

　雄では、Ｒ−２群でＴ−ＰＲＯおよびＧＬＵがＮ−２群に比べ有意の減少を、ＮＥＦＡ、ＮａおよびＣｌが有意の増加を示す。また、Ｒ−６群でＡＬＰおよびＬＡＰがＮ−６群に比べ有意の減少を、Ｎａ、ＫおよびＣｌがいずれも有意の増加を示す。雌ではＲ−２群でＬＡＰおよびＣｌがＮ−２群に比べ有意の増を示し、Ｒ−６群でＴ−ＰＲＯ、Ｔ−ＧＬＹ、Ｔ−ＣＨＯおよびＦ−ＣＨＯがＮ群に比べいずれも有意の増加を、Ｎａ、ＫおよびＣｌが有意の減少を示す。

　上述のように６、１２、１８および２４ヶ月目の各時期で群間にいくつかの差が見られるが、同一添加量の非照射群および照射群の間で一定傾向の差は見られない。